魚粉中氨基酸的高效液相色譜(hplc)檢測方案
隨著我國飼料工業的發展,魚粉的需要量逐年增加,魚粉的質量問題越來越引起飼料行業、養殖業的重視。魚粉是水產飼料的主要蛋白源,尤其含有動物生長所必需的氨基酸,由于魚粉用量大,價格高,有些廠家摻雜使假、以次充好,使魚粉質量參差不齊,這一行為業給魚粉品質分析帶來了一定困難。因此,有必要建立一個有效的手段對魚粉中氨基酸進行定量分析。
魚粉圖片
以下是賽智科技利用LC-10Tvp高效液相色譜儀對魚粉進行的HPLC檢測方案。
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1、儀器與試劑
1.1儀器、設備
LC-10Tvp高效液相色譜儀
Vertex 色譜柱AA:250mm×4.6mm×5μm
分析天平
恒溫箱,溫度控制在110±1℃
微量進樣器,(20μL)一支
漩渦混勻器
氮吹儀
針頭過濾器
微孔濾膜:0.45μm
1.2試劑
鹽酸溶液,6mol/L:將優級純鹽酸與水按1:1(V/V)混合。
氨基酸標準工作溶液。
乙腈,色譜純。
三水合醋酸鈉,優級純。
冰醋酸。
正己烷,色譜純。
2、供試品溶液和對照品溶液的制備
對照品溶液的制備 取氨基酸混合工作標液500ul,用水稀釋至5ml,即得。
供試品溶液的制備 稱取試樣50-100mg(準確至0.1mg)于據塞試管中,加入6.0mol/l鹽酸10ml,混勻,充分提取10min,蓋緊蓋子。將樣品置于110℃恒溫干燥箱中,水解22-24h。冷卻后充分混勻,過濾。根據實驗要求移取適量上清液,60℃下氮氣吹干,備用。以下按照衍生方法包進行。
方法包衍生方法:將恒溫水浴鍋預熱至50±1℃,分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋至原來濃度的1/5倍。精密量取上述對照品1ml,至于試管中,加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml,搖勻;在50±1℃的水浴中加熱45分鐘,取出,加入正己烷溶液1ml,振搖;并用孔徑為0.45μm有機膜過濾,放置30min后,取澄清的下層液進行分析實驗。供試品的衍生步驟與對照品相同。
3、色譜條件
色譜柱:AA 4. 6 mmx250 mm,粒度5 μm
流動相:
流動相A:0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH6.5):乙腈=93:7
配置方法:準確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中,攪拌均勻,溶解,用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調節pH值至6.5; 準確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml,混合均與,抽濾,過0.45μm濾膜。
流動相B:水:乙腈=20:80。
配制方法:準確量取水100ml和乙腈400ml,混合均勻,抽濾,過0.45μm濾膜。
波長:254nm
流速:1. 0 mL/min
梯度設置:
4、測定法
分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul,注入液相色譜儀,測定,即得
5、譜圖
技術與服務
TECHNICAL SERVICES