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百事可樂被指使用致癌色素，據英國《金融時報》7月4日報道,美國監督機構——環境健康中心表示,在美國10個州購買的百事可樂含有4-甲基咪唑,這是一種與嚙齒動物肺癌腫瘤有關的化學物質。目前國家風險評估中心正在對可樂焦糖色素含有的4-甲基咪唑是否會對人體產生影響進行評估，我國還將修訂焦糖色素限量標準。據了解，在我國現行食品質量國標中，可樂中焦糖色素沒有限量標準，只規定按生產需要適量使用。

4-甲基咪唑源于生產飲料所用的焦糖色素中，焦糖色素與其他人工合成色素相比，具備價格價廉、安全無毒等優點，被越來越廣泛地應用于醬油、醋、可樂、冷飲等食品工業中。然而，因為焦糖色素在制造過程中往往要使用氨或銨鹽，這種物質和其它原輔料發生反應，生成附帶產物4-甲基咪唑。4-甲基咪唑為神經毒，能引起驚厥。長期食用會導致動物長腫瘤，有可能會對人體造成致癌風險。而據英國《每日郵報》報道，美國一公益組織檢測全球多個國家的可口可樂中4-甲基咪唑的含量，發現美國355毫升可樂中4-甲基咪唑含量為4微克，中國為56微克,英國為135微克，巴西則高達267微克。

針對“可樂致癌”事件，賽智科技第一時間參考大量的文獻方法，利用賽智科技全新高性能的LC-10Tvp型高效液相色譜儀，經實踐檢驗可提供焦糖色素中4-甲基咪唑的HPLC檢測方案，得出的結果準確可靠，檢出限好，僅供廣大用戶參考。

LC-10Tvp高效液相色譜儀是賽智科技（杭州）有限公司為了快速地滿足多樣化的客戶需求，在原有的STI501液相色譜儀的基礎上經過優化，利用美國先進技術開發設計，國內加工生產的的一款新型的液相色譜儀。LC-10Tvp等度高效液相色譜儀可廣泛應用于研究開發、醫藥檢驗、食品檢測、化工分析、環境監測等眾多分析領域。

    以下是高效液相色譜法對焦糖色素中的4-甲基咪唑的詳細檢測方法。

（本應用方案請勿轉載，侵權必究）

1、儀器與試劑

    1.1儀器、設備

    LC-10Tvp高效液相色譜儀

    Vertex 色譜柱：150mm×4.6mm×5μm

    分析天平

    旋轉蒸發儀

    分液漏斗250ml

    振蕩器

    針頭過濾器

    微孔濾膜：0.45μm

    1.2試劑

    甲醇（色譜純）

    無水乙醇

    三氯甲烷

    三氯甲烷-無水乙醇萃取液（80: 20)：移取80 mL的三氯甲烷及20 mL的無水乙醇混合均勻備用

    碳酸鈉

    碳酸鈉溶液（100 g/L )：準確吸取碳酸鈉100 g于1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度

    庚烷磺酸鈉

    磷酸二氫鉀

    磷酸

    磷酸二氫鉀緩沖液（0.05mol/L）：稱取磷酸二氫鉀6.8g，庚烷磺酸鈉1g于1000ml容量瓶中，加水900ml，用稀磷酸調pH至3.5，用水定容至1000ml。 

    4-甲基咪唑標準品：純度>99 %o

    4-甲基咪唑標準儲備溶液：準確稱取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中，用流動相溶解定容至刻度。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL，作為貯備溶液。

2、試樣溶液的制備

準確稱取3g樣品（精確至0. 001 g)，加15mL水溶解，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸鈉溶液15 mL，加三氯甲烷-無水乙醇萃取液60 mL，劇烈振搖5 min。靜置分層后，將有機相移入另一分液漏斗中，水相再按同樣方法萃取一次，合并有機相；用100 g/L碳酸鈉溶液洗滌提取液3次，每次30mL。然后將有機相通過無水硫酸鈉濾入旋轉蒸發瓶中，50℃濃縮至近干，取下，以水溶解殘渣并定容至10ml，經0.45μm微孔膜過濾后供HPLC分析。

3、色譜條件

    色譜柱：C18, 4. 6 mmx250 mm，粒度5 μm

    流動相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（(pH 3.5，含0. 1％庚烷磺酸鈉）=5: 95

    波長：210nm

    流速：1. 0 mL/min

4、樣品測定

    標準曲線：將4-甲基咪唑標準溶液配置成一系列標準溶液，分別進標準系列溶液各10μL，進行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標，以4-甲基咪唑的含量為橫坐標，繪制標準曲線。

    樣品測定：吸取10 μL試樣溶液進行HPLC分析，測定其峰面積，從標準曲線查得測定液中4-甲基咪唑的含量。

5、4-甲基咪唑的標準色譜圖